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宝马娱乐在线没有同能量火平下加减晶体DL-蛋氨酸对罗非鱼死少功能及体构成的影响

试验表明,在罗非鱼越冬前,采取用鱼油替代豆油、添加维生素E等营养强化措施,可显著提高罗非鱼越冬期间的抗寒能力以提高其成活率

鱼类的生长主要受摄食和水温的控制(Brett,
1979)。在冬季来临时,水温降至鱼类生长的适宜温度以下,大多数鱼停止摄食,部分鱼摄食强度急剧下降,但是在这样的状态下,鱼类还是要通过消耗能源物质来维持其基本的生命活动,所以机体必须做出一系列变化来适应这一极端状态。鱼类越冬的适应过程分为4个阶段,分别是初冬的紧张期和适应期、越冬中期的稳定期以及越冬末期的恢复期。在整个越冬期间,鱼类适应低温和饥饿的反应及机理主要体现在其生长和形态学指标、鱼体体组成和血液指标三个方面。1.
生长和形态学指标变化鱼类越冬期间,个体体重显著下降是适应低温和饥饿双重压力的结果,在食物匮乏或停食的情况下鱼类只能消耗机体自身储存的能量物质来维持基本的生命活动,几乎所有越冬饥饿鱼类都出现了体重和肝重的显著下降(Pastoureaud,
1991;陈立侨等, 1993; Kim和Lovell,
1995)。已经有大量研究表明饥饿对于体重的影响要大于低温,在越冬期间持续或间断性摄食的鱼类体重有所增加,而没有喂食的鱼类体重显著减少,说明冬季鱼体重的下降更多的受到饥饿的影响(Lovell和Sirikul,
1974; Reagna和Robinette, 1978; Bastrop等, 1991; Kim和Lovell,
1995)。Kim和Lovell(1995)发现越冬期间连续摄食的斑点叉尾鮰与间断摄食(12月、1月和2月不投喂)的斑点叉尾鮰相比,体重没有显著的变化,而饥饿的鱼与之相比,体重差异明显。越冬的草鱼也有类似的结果,投喂较少的草鱼鱼种月增重率仍达2.3%,而同等条件下,饥饿组消瘦了3.43%。相比较饥饿而言,温度对越冬鱼类体重的影响表现在两个方面:对于冬季还可摄食的鱼来说,温度的影响主要体现在食物的转化效率上,不管是连续投喂还是间断性投喂,鱼类冬天的饵料转化率都很低;另一方面,温度可能对饥饿有叠加效应。低温时,可减少体重丢失,随着温度的升高,体重丢失更显著。肝体指数被看作是鱼类对长期和短期营养方式很敏感的形态学指标(梁友光,
2005)。Mustafa等(1991)发现舌齿鲈在越冬开始后肝体指数下降,到一月份降至最低,然后在二月份转而上升,认为肝体指数的这种转折可能与此时水温开始上升、白昼不断延长等环境因素的改变有关。梁友光(2005)研究发现脏体指数反映了鱼体内脏重量的变化,在低温胁迫的情况下,鱼类动用腹脂来满足能量需求,并且随温度的降低动用腹脂的程度加强,在低温和饥饿双重胁迫的条件下,由于腹脂的大幅度消耗而使得内脏重量显著下降。Bosworth和Woletrs(2005)发现脏体指数随鱼摄食条件的好坏而改变,稳定摄食的鱼,其脏体指数高于限制摄食的鱼,而摄食的鱼又高于不摄食的鱼。此外,在鱼类正常摄食的情况下,腹脂储留程度显著高于其他摄食不良的鱼。2.
鱼体体组成变化鱼类越冬的适应过程表现在鱼体体组成的变化为在越冬结束时肌肉中的水分含量显著上升,鱼体的脂肪和蛋白质含量显著降低,肝脏中的脂肪和糖原显著减少,肌肉和肝脏中的饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸含量显著减少,鱼体脂肪酸的不饱和性增高。Bastrop等(1991)认为由于越冬期间鱼体停食且体内能源物质不断消耗,使饥饿鱼体代谢的一些内源性物质被水取代,导致含水量和灰分含量逐渐上升。梁友光(2005)的研究发现长吻鮠肌肉水分含量随越冬时间的延长而增加,说明了越冬过程中肌肉组织的一些营养物质被消耗,但在越冬20天时,水分含量出现减少的现象,而同一时间,蛋白质含量有一个提升,这种现象也许预示了越冬前期鱼体对低温和饥饿的适应和调整,在一定调整后水分含量再次增加,并在越冬结束时显著高于越冬开始时。越冬期间鱼类动用机体贮存的能量来维持生命活动,作为主要贮能物质的糖原、脂肪和蛋白质在越冬过程中将会不同程度地被消耗。在越冬开始的过程中,温度这个因子的变化对鱼体施加了影响,从而改变了其代谢水平,尤其在初期,鱼类为了应对并适应这种环境的改变,将会加大能量的消耗,因此相应的肌肉粗蛋白和粗脂肪含量都会出现不同程度的下降。在多数鱼类中,脂肪和糖原是主要的贮能物质,由于蛋白质的关键代谢酶谷氨酸转氨酶的活性在20℃时下降,导致蛋白质分解速率降低,从而在饥饿过程中首先主要消耗脂肪和糖原,然后才较多地利用蛋白质(Mehner和Wieser,
1994)。如大西洋鳕(Gadus
morhua)以及一些软骨鱼类,饥饿时优先动用脂肪,日本鳗鲡和多不饱和脂肪酸比例的增加,增加了膜双层组织的无序性,因而使膜的流动性增加,这种反应是膜流动性对于温度适应的表现(童圣英,
1997)。Lovell(1989)指出鱼的脂肪酸需求取决于温度,低温下生活的鱼类如鲑鱼需要n-3系列的脂肪酸,因为n-3结构可以允许的双键数目多,这是鱼在低温下磷脂膜保持柔软性和渗透性所必不可少的。降低脂肪酸熔点、提高膜脂流动性主要依靠长链不饱和脂肪酸,单烯酸的作用远不及多烯酸,所以鱼类在越冬时以单烯酸的减少来保证多烯酸含量的稳定。越冬期间,肝脏的不饱和脂肪酸减少,一方面预示了肝细胞膜的流动性变差,另一方面肝脏为了维持机体基本的生理功能,通过增加多烯酸的比例来增加膜的流动性和渗透能力。渗透调节能力的损害被用来解释各种淡水和海水鱼类低温时成活率的下降(Wikgern,
1953; Hochachka, 1988; Belkovsky等,
1992)。膜通透性的变化和离子转运机制的破坏降低了鱼对低温的渗透调节能力(Wikgern1953;
Morris和Bull, 1968; Schwarzbaum等,
1991)。越冬期间,肌肉和肝脏多烯酸比例基本保持稳定或升高,是为了保证膜的流动性和提高低温下的渗透调节能力而保证成活率所作的代谢调整。此外,Jezierska等(1982)发现在食物匿乏时,鱼类优先利用单烯酸可能更有利于能量的释放和利用,而机体合成多不饱和脂肪酸所耗能量较大,优先利用单烯酸以及延缓对多烯酸的利用,对机体而言是有利的。3.
血液指标变化鱼类越冬的适应过程表现在血液指标上为红细胞数量在越冬过程中不断下降,白细胞数量在越冬前期上升,到了一定阶段后开始下降;血糖、胆固醇、甘油三脂含量在越冬初期有所下降,随后上升,并恢复到正常水平或者显著高于正常水平;血清总蛋白含量随越冬时间的延长而逐渐下降。血液是动物体内一种非常重要的物质。血液指标能反映某个物种的属性以及生理状态(Bollard等,
1993; Hlavova, 1993; Takeda, 1993; Yrtestoyl等, 2001; Fijna,
2002)。鱼类是一种变温动物,其体温是随着外界环境的变化而变化的,其血液与机体的代谢、营养及疾病都有着非常密切的关系,当鱼类因为受到外界环境因子的影响而发生生理或病理变化时,或多或少都会在血液指标中反映出来。由于红细胞和血红蛋白的特性,使得红细胞可以在很大程度上决定氧的运输能力,因此其数量和体积的变化影响了机体的代谢性能,同时从白细胞的数量变化也能揭示出机体免疫功能的改变。由于受到了低温环境的胁迫反映,鱼类活动能力和代谢机能下降使得红细胞数显著降低。在越冬初期,低温和饥饿对鱼产生了胁迫,血液中的白细胞数量的急剧升高表明了机体对于环境的适应和调整,当机体适应冬季的环境条件后,白细胞数量便基本恢复到了以前的水平。沈文英等(2003)对饥饿银鲫的研究结果显示,饥饿2周后,银鲫白细胞数量显著上升。梁友光(2005)发现长吻鮠在越冬前期白细胞数量有一个显著的升高,而后在越冬50天时下降,这种现象应对了长吻鮠对水温和摄食状态的变动。在越冬初期,低温和饥饿对长吻鱿产生了胁迫,长吻鮠白细胞数量的急剧升高表明了机体对于环境的适应和调整,在越冬50天逐渐适应后鱼体的免疫反应减弱。鱼类受到低温胁迫,机体需要大量的能量来抵抗环境的变化,血糖被大量消耗,同时低温使鱼体代谢下降,体内各种酶的活性下降,糖原分解及糖异生途径减缓,种种因素导致了鱼类在越冬过程中血糖显著降低(钱云霞等,
2002)。当随着越冬过程的深入,鱼体对环境的变化有一定的调整和适应能力,在逐渐适应环境变化后,体内趋于新的稳态,同时蛋白质和脂肪物质的消耗使糖异生途径加强,血糖含量不断上升,最终恢复至正常水平。有关研究也曾指出,血糖的维持主要靠糖异生作用(孙红梅,
2004;钱云霞等,
2002)。血清中甘油三酯和总胆固醇的量分别代表了机体能够摄取或合成甘油三酯和胆固醇的多少。越冬过程中,鱼体血清中甘油三酯和胆固醇在初期开始降低,说明作为能源物质的甘油三酯被大量消耗,同时低温胁迫使鱼体代谢下降,各种酶的活性降低,两种物质的合成减缓(何福林等,
2007)。随着越冬时间的延长,机体不断的调整和适应,两种物质含量不断上升,最终在越冬末期总胆固醇回升至正常水平,而甘油三酯显著高于正常水平,可能是与膜的通透性有关。常玉梅等(2006)的研究认为,动植物的抗寒特性与细胞膜膜脂的组成和结构有关,其中最为流行的学说是Lyons提出的“膜脂相变”学说,该学说认为膜脂不饱和脂肪酸含量高,膜的相变温度就低,因此可以通过操纵脂肪酸脱饱和反应来改善抗寒性(张羽航,
2001)。鱼类的脂肪酸代谢对体温降低的适应很敏感,通过积累长链不饱和脂肪酸的含量,可以使膜在低温胁迫时仍保持稳定性和流动性,从而提高自身的抗寒能力。越冬结束时甘油三酯含量显著高于正常水平,可能是由于低温诱导不饱和脂肪酸含量增加的结果(Tyler和Dunn,
1976)。血清中蛋白质分为两种,一种是白蛋白,一种是球蛋白。白蛋白可以修补组织,还可以维持血浆交替渗透压。球蛋白是免疫性抗体,参与机体特异性免疫。血清总蛋白可以用来诊断鱼类的健康、营养和疾病状况。一般认为饥饿会引起总蛋白、白蛋白和球蛋白减少(赵海涛,
2006)。越冬初期低温胁迫使鱼体出现应激反应,鱼体为了抵抗环境的变化,体内合成了大量的球蛋白用以防御病害的入侵,越冬后期,血清蛋白含量出现了不同程度的下降,应该是长期的低温胁迫使鱼体肝脏受到一定程度的损伤,导致肝脏合成蛋白的能力下降,同时也说明机体的组织修补、渗透压调节等生理功能均受到影响(孙红梅,
2004)。4.
总结越冬过程中鱼类在受到低温和饥饿的双重压力下,在初期产生了强烈的应激反应,此后不断通过消耗鱼体自身储存的脂肪、糖原、蛋白质等能源物质维持机体的正常代谢和生命活动,并且通过内部调节提高了脂肪酸的不饱和性和血液中免疫细胞的含量,从而增加了鱼体生物膜的流动性、渗透压调节能力和免疫能力。这些越冬过程中鱼体产生的所有调节和适应反应的目的只有一个,就是提高鱼类在越冬过程中的成活率,使其能顺利度过这一极端时期。
(来源:《中大水生通讯》第56期 作者:广州市诚一水产科技有限公司 李如伟)

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□文/广西南宁百洋饲料集团有限公司张佳明

中国水产门户网报道氨酸的需要量随着饲料中能量水平的升高而升高;低能水平下(16.86MJ·Kg-1)罗非鱼对蛋氨酸的需要量为0.80%,高能水平下(17.82MJ·Kg-1)罗非鱼对蛋氨酸的需要量为0.93%。文/赢创德固赛投资有限公司高文董延蛋氨酸是鱼类的必需氨基酸,在体内可直接或间接参与蛋白质的合成。蛋氨酸的缺乏会影响机体氮平衡,导致养殖鱼类的生长速度下降,饲料效率降低,某些鱼类还会出现白内障(Walton等,1982;Keembiyehetty和GatlinIII,1993)。通常来说植物蛋白源饲料的第一限制性氨基酸是蛋氨酸(Goff和GatlinIII,2004),在饲料中添加的晶体蛋氨酸可被鱼体有效利用(Ai和Xie,2005;Takagi等,2001;Mambrini等,1999;林仕梅等,2008)。已有研究表明,增加饲料中非蛋白能量的水平能够提高可消化蛋白质的利用率,这是由于增加的非蛋白能源提供了能量消耗(Cho和Kaushik,1985,1990);也可能是能量的增加一定程度上提高某些限制性氨基酸的利用效率,使之尽可能多地用于N的沉积(Schroeder等,2007;Schroeder等,2006;Encarna??o等,2004)。通过对鲑鳟鱼、罗非鱼、草鱼等的试验表明,在一定程度范围内提高饲料脂肪含量均可明显提高鱼类生长率、饲料效率与蛋白效率。另有报道,饲料能量含量会影响鱼类的摄食,高能量饲料会导致摄食量降低从而对EAA有更大的需求(Rodehutscord等,2000)。生产实践中,廉价的能量饲料原料已经越来越广泛地应用于水产饲料,但能量水平的高低对饲料中的EAA尤其是限制性氨基酸的利用有何影响?这是值得研究的问题。本实验以奥尼罗非鱼(Oreochromisniloticus×Oreochromisaureus)为实验对象,研究两种不同能量水平下添加晶体蛋氨酸对罗非鱼生长、饲料利用和体组成的影响。实验共设计了10组等氮饲料,以豆油为能量源,其中1-5为低能组(16.86MJ·Kg-1),通过额外添加晶体DL-蛋氨酸使饲料Met含量分别为0.49%、0.55%、0.62%、0.80%、0.99%,6-10高能组(17.82MJ·Kg-1),通过额外添加晶体DL-蛋氨酸使饲料Met含量分别为0.47%、0.55%、0.65%、0.83%、0.93%。实验共分10组,每组设3个平行,每箱30尾鱼,初始鱼重为8.95±0.06g,实验周期为8周。实验结果表明:罗非鱼对蛋氨酸的需要量随着饲料中能量水平的升高而升高;低能水平下(16.86MJ·Kg-1)罗非鱼对蛋氨酸的需要量为0.80%,高能水平下(17.82MJ·Kg-1)罗非鱼对蛋氨酸的需要量为0.93%。一、材料与方法1、实验饲料及实验设计饲料配方及营养组成如表1,各实验饲料氨基酸组成分析结果如表2。饲料为实用等氮饲料,以豆粕、棉粕、菜粕等几种植物蛋白原料作为蛋白源,通过调整豆油、面粉和米糠粕设置出两个能量水平(低GE:16.9MJ·kg-1;高GE:17.8MJ·kg-1),每个水平下分别添加0%、0.10%、0.20%、0.40%和0.60%的DL-蛋氨酸,使得每个能量水平的蛋氨酸含量分别为0.48%、0.58%、0.68%、0.88%和1.08%(实测值则为0.48%、0.54%、0.64%、0.82%和0.96%)。

在两广地区,每年冬季低温天气会维持1-2个月以上,这段时间有大量的鱼种、成鱼和亲鱼需要越冬,历年越冬均有一定的死亡,尤其是热水性鱼类如罗非鱼、淡水白鲳等。鱼类越冬死亡的原因很多,除遗传因素、水质因素外,由于营养失衡而造成鱼类免疫力下降也是一个不可忽视的因素。通过营养途径提高鱼类抗寒力有重要意义。

将原料按表1配方中的比例准确称取后,用搅拌机(A-200TMixerBenchModelunit,RusselFoodEquipmentLtd.,Canada)搅拌15min,之后加入豆油和大豆卵磷脂,同时搅拌并加入400-500g·kg-1的水分,饲料通过双螺旋挤压机(华南理工大学化工学院,中国)挤压出来。饲料粒径为2.5mm。饲料经制粒,晒干后储存于-20℃,直至使用。饲料粗蛋白、粗脂肪、灰分、总能的测定方法分别为凯氏定氮法(1030-Auto-analyzer,TecatorAB,Sweden),索氏抽提法(HT6,TecatorAB,Sweden)、马福炉550℃灼烧法和氧弹法。原料和饲料的氨基酸组成用氨基酸自动分析仪(Hitachi,Model835-50,Hitachi,Tokyo,Japan)分析。2、实验鱼与饲养管理实验用罗非鱼购自广州番禺公司,平均体重为8.95±0.06g。实验鱼均饲养在室内循环水族箱中,实验用水经珊瑚沙和生化棉过滤,采用低压鼓风机提供氧气,溶氧水平维持或接近饱和,水温为29±1℃,氨氮小于0.04mg·L-1,pH为7.9±0.1。商用饲料暂养两周后,选择大小均匀、体格健壮的幼鱼随机分配于30个水族箱(10个处理组,每组3个重复),每箱25尾。每天投喂2次(09:00,16:30),接近饱食的定量投喂。试验持续8周。3、样品采集及化学分析实验开始前随机取20尾鱼保存在-20℃用于体组成分析。实验结束,将鱼饥饿24小时后称重记录作为终末体重,以进行生长指标计算。经麻醉剂(MS-222,10mg·L-1)麻醉后,取2尾用作全鱼组成分析;6尾解剖并称内脏、肝脏和肠系膜脂肪重量。取得所有样品后即刻称重记录并在105℃烘箱中烘至恒重,以测定水分含量,之后放入干燥器中保存待测。全鱼、肌肉、肝脏和粪便样品常规测定同饲料。饲料和粪便中Y、P的含量用等离子体原子发射光谱仪(IRIS,America)测定。4、计算与统计分析增重率=100×/初均重特定生长率=100×-ln/天数摄食量=投喂总干重/尾数饲料效率=/投喂饲料干重蛋白质效率=(终末体重-初始体重)/蛋白质摄入量蛋白质保留率=100×实验结束时每尾鱼蛋白增加量/每尾鱼蛋白摄入量。能量保留率=100×实验结束时每尾鱼能量增加量/每尾鱼能量摄入量肥满度=100×体重/3脏体比=100×内脏重/体重肝体比=100×肝重/体重脂体比=100×肠系膜脂肪重/体重本试验中所有数据均用3个平行的均值±标准差表示,并用单因素方差分析检验试验处理的影响。对Met和DE进行双因素方差分析(UnivariateanalysisofVariance),并检验它们之间的交互作用。统计软件为SPSS13.0。采用Duncan’s多重比较来检验试验处理均值间差异的显著性。当p<0.05时,表示均值间差异显著。

到目前为止,有关罗非鱼营养生理的研究己有充分报道,但低温对罗非鱼生理影响及抗低温的营养措施研究较少。本研究旨在探讨越冬前营养强化对罗非鱼生长和存活情况的影响,为罗非鱼的营养生理研究和优质高效的人工配合饲料开发提供基础资料。

二、结果1、生长和摄食由表3可知,饲料Met和GE水平对罗非鱼的末重、增重率及特定生长率均有显著影响(p<0.05),但两者间无交互作用(p>0.05)。WG和SGR随饲料中Met含量的增加而显著提高(p<0.05),在低GE组添加0.4%Met获得最大生长,但进一步提高蛋氨酸含量至0.6%,罗非鱼的生长性能有所下降,在高GE组添加0.6%获得最大生长;在同一Met添加水平下,高GE组的生长性能高于低GE组(p<0.05)。罗非鱼的摄食量与WG、SGR呈相似变化;而饵料系数在各组间均没有显著差异(p>0.05);根据双因子分析,饲料中的Met水平和GE水平显著提高了蛋白质效率、蛋白保留率和能量保留率(p<0.05),但两者间没有交互作用(p>0.05)。在低GE水平下,0.2%Met添加组的蛋白质效率、蛋白质保留率和能量保留率显著高于0.4%添加组(p<0.05),其他各组之间差异并不显著(p>0.05);在高GE水平下,蛋白质效率、蛋白质保留率和能量保留率随着Met含量的增加而显著上升(p<0.05),且高GE水平下各组的能量保留率显著高于低GE组(p<0.05)。2、罗非鱼形态学指标如表4所示,罗非鱼的肥满度和肝体比不受饲料Met和GE水平影响,各组间没有显著差异,且不存在交互作用(p>0.05)。随着GE的增加,同一Met水平的脏体比和脂体比显著上升(p<0.05)。3、鱼体生化成分罗非鱼鱼体生化组成结果见表5。饲料的Met水平对罗非鱼的体组成没有显著影响(p>0.05),而饲料中能量水平的增加显著提高了全鱼和肝脏的脂肪含量(p<0.05),从而在一定程度上降低了全鱼水分、肌肉蛋白和肝脏水分的含量。

1、材料与方法

三、讨论作为蛋白合成的重要元素,蛋氨酸的缺乏会造成体蛋白沉积下降。在鱼类中,当饲料中的蛋氨酸不足或者过量时,均会影响其摄食、生长及体组成(Sveier等,2001;Mambrini等,1999;林仕梅等,2008)。林仕梅报道,在实用饲料Met水平为0.45%的基础上添加0.1%晶体蛋氨酸,罗非鱼的特定生长率达到最大,蛋白质沉积率随着添加水平的增加而显著提高,实用饲料中补充的晶体蛋氨酸是能够被罗非鱼有效利用的。本实验中,在各能量水平下,Met的添加显著提高了罗非鱼的增重率和特定生长率,与上述结果一致。Takagi等研究发现,在真鲷幼鱼的大豆蛋白浓缩物饲料中添加Lys、Met、Lys+Met,只有添加第一限制性氨基酸Met或Met+Lys,才能显著提高真鲷幼鱼的生长,仅添加Lys甚至会带来负面影响。Encarna??o等研究发现,在两个DE水平下,虹鳟的增重率均随饲料Lys水平的增加而增加,通过线性回归分析得出,两个条件下的Lys的需要量是一致的。而本实验中,高GE水平下,随着饲料中添加蛋氨酸水平的增加,罗非鱼的生长性能显著提高,且在0.6%添加组(实际含量0.93%)获得最大生长;而在低GE水平下,随着饲料中蛋氨酸添加量从0%上升到0.4%,罗非鱼的增重率显著上升并在0.4%添加组(实际含量0.80%)获得最大生长,当再进一步增加蛋氨酸含量至0.6%时,罗非鱼的生长性能有所下降。由此可见罗非鱼在高能水平下对蛋氨酸的需求量增大。已有大量研究表明,鱼类的摄食量受到能量的调控,高能水平下导致鱼类摄食量减少(KaushikandMédale,1984;Yamamotoetal,2000;Bendiksenetal,2002)。然而,在本实验中罗非鱼的摄食并未受到能量水平的影响,这可能是因为本实验中饲料组之间的能量差异较小(0.9kJ·g-1)。Gélineau等研究表明,只有当饲料组之间的能量差异达到2.2kJ·g-1以上的时候,鱼类的摄食活性才会有明显的变化。另外,高GE组的增重率(802%-903%)和特定生长率(3.92%d-1-4.12%d-1)显著高于低GE组(797%-848%,3.92%d-1-4.02%d-1),本实验室研究亦表明,在一定的蛋白下,随着豆油添加水平从2%提高至7%,罗非鱼的生长水平也随之升高。当能量不足时,饲料中的氨基酸会倾向于分解为能量;随着能量水平的增加,氨基酸的利用效率得到提高,更多地用于机体蛋白的合成。本实验中,高GE组的蛋白保留率和蛋白质效率均显著高于低GE组,支持了上述观点。与此相似,Encarna??o等报道可消化能水平会影响虹鳟对饲料中的赖氨酸的利用效率,同一Lys水平下,20MJ·kg-1DE组显示出更高的生长性能、Lys的沉积及Lys利用效率(与16MJ·kg-1DE组相比)。Schroeder等研究发现即使Met不足,通过添加能量仍可以提高肉牛的N的沉积。四、结论以上结果表明,低GE水平时,在饲料Met添加含量为0.80%时,罗非鱼可获得最大生长;而在高GE水平时,在饲料Met含量为0.93%的基础上继续添加Met,仍可显著提高罗非鱼的生长和饲料利用,即随着能量水平的提高,罗非鱼对晶体DL-蛋氨酸的需求量增加。

1.1实验鱼来源及驯化
试验鱼来自广西南宁百洋养殖有限公司,为当年人工孵化的同一批奥尼品系罗非鱼,全雄率达95%以上。正式实验前在2×2×1.5m的池塘网箱中驯化15d。以对照组试验饲料(Diet1号饲料)隔天饱食投喂,使试验鱼逐渐适应试验饲料及池塘中网箱的养殖环境。

宝马娱乐在线没有同能量火平下加减晶体DL-蛋氨酸对罗非鱼死少功能及体构成的影响。1.2实验饲料
以鱼粉、豆粕、棉粕、菜粕为蛋白源,鱼油和豆油为脂肪源,小麦粉为补充能源,配制成4种试验饲料,分别称为Diet1、Diet2、Diet3和Diet4号饲料(表1)。其中,Diet1号饲料为对照组。试验饲料由广西南宁百洋饲料有限公司加工生产,所有原料经粉碎后按配比定量均匀混合,经制粒机加工制成硬颗粒饲料(2.0×3.0mm)。每种饲料中分别取定量的样品,保存于-20°C下用于分析常规营养组成。
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1.3实验操作程序
宝马娱乐在线,试验在池塘网箱养殖系统中进行,2008年11月20-2008年12月28日期间进行越冬前营养强化。实验开始前,停止投喂1d,再以丁香酚(1∶10000)对罗非鱼进行麻醉后称量(精确至0.01g)。从中挑选出体格健壮,体重相近(49.27±1.63g)的罗非鱼作为实验对象。每个试验网箱(2×2×1.5m)放养120尾罗非鱼,每种饲料设立3个重复,每天投喂2次(08:30和16:30),达到饱食状态。投喂期内水温16-22°C。
2008年12月29-2009年2月25日期间为越冬期,水温降低至13-16°C,溶氧维持在5mg•L-1左右,试验鱼停止摄食,处于休眠状态,停止投喂。整个试验期间每天早、中、晚巡塘,观察试验鱼活动及摄食情况,每次投喂后记录摄食量,如有死鱼记录数量并称重。越冬结束后,对试验鱼进行计数并称重。

1.4样品分析
样品制备从各组随机抽取5尾鱼保存于-20°C冰箱,用于常规分析。
样品分析测定方法饲料及鱼体的样品均在105°C烘干至恒重后求得干物质含量,然后进行生化组分分析。采用自动定氮仪(Kjeltec2300,Sweden)测定粗蛋白含量;采用索氏抽提法,以乙醚为抽提剂测定粗脂肪含量;将样品在电炉上炭化后,在马福炉中550°C灼烧8h后测得样品灰分含量(AOAC,1995)。每份样品均重复测定2次,若相对偏差大于2%,则增加重复次数,采用相对偏差在2%以下的两个测定值的平均数为测定结果。

1.5计算及统计方法
以下各参数的计算公式为:
存活率=(N0-Nt)/N0×100%;
体增重(WG)=Wt–Wo
饲料转化率(FCE)=(Wt–Wo)/Id
其中,N0和Nt分别为每网箱初始和死亡的罗非鱼尾数,Wt(g)为终末体重,Wo(g)为初始体重,t(d)为实验时间,Id(g)为摄入饲料干重。
采用SPSS11.0forWindows对所得数据进行方差分析,若差异达显著,然后进行Tukey多重比较,显著性水平为P<0.05。

2、结果

2.1不同处理组饲料对罗非鱼生长状态参数的影响
实验结果表明,在对照组饲料基础上用鱼油替代豆油,添加维生素E对罗非鱼的体增重(24.46-27.66g)和饲料转化率(0.61-0.64)均无显著影响(P>0.05)(表2),但却显著影响了罗非鱼的成活率。鱼油替代豆油组(Diet2),添加维生素E组(Diet3),鱼油+维生素E组(Diet4)罗非鱼成活率分别为86.3%、84.3%、87.5%,显著高于对照组74.4%(Diet1)(P<0.05),但在3个试验饲料组之间差异不显著(P>0.05)(表2)。
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2.2不同处理组饲料对罗非鱼体组成的影响
实验罗非鱼鱼体的粗蛋白含量在15.91%-17.07%之间、粗脂肪含量在7.47%-8.61%之间,灰分含量在3.52%-3.55%之间,水分含量在69.61%-70.50%之间,且各处理组间均无显著差异(P>0.05)(表3)。
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3、讨论

从试验结果可以看出:在饲料配方中以鱼油替代豆油,添加维生素E虽然对罗非鱼的生长、饲料利用和体组成没有影响,但营养强化措施提高了罗非鱼越冬的成活率,越冬期间表现出较好的抗寒能力。其中,鱼油组(Diet2)与鱼油+维生素E组(Diet4)罗非鱼抗寒力高于添加维生素E组(Diet3)。
目前,对鱼类营养调控抗寒力的机制已经有相关研究。lyons等(1970)提出“膜脂相变”学说,认为低温使膜脂从液晶相变为凝胶相,膜脂的改变使生物膜的流动性发生变化。凝胶相的流动性降低,使生物膜丧失部分正常功能,从而给生物体带来伤害。低温下生物膜保持良好的流动性有利于抵御低温伤害,而生物膜的流动性主要取决于膜脂的脂肪酸组成。Farkas(1980)证实鱼体温降低时脂肪酸代谢使得磷脂中长链不饱和脂肪酸(特别是DHA)增加,由于长链不饱和脂肪酸主要影响膜的流动性,可以认为这是膜流动性对于温度适应的表现。将遮目鱼(Chanoschanos)从25°C的水体直接转入15°C水体后,肝脏microsomes饱和脂肪酸含量在5天时间内从76.5%降至13.4%,而不饱和脂肪酸含量则从25.3%上升至70.4%,特别是高不饱和脂肪酸的比例在3天内就从7.17%上升至31%(Hsieh等,2003)。邓会山(1993)比较了不同温度条件下草鱼、鲢、黑龙江野鲤、建鲤及尼罗罗非鱼红细胞膜的流动性,发现随着温度的下降各种鱼的红细胞膜流动性均降低,以罗非鱼下降最为显著。以上研究结果表明,在越冬前的配合饲料中加大n-3PUFA,特别是EPA和DHA的含量,使鱼体内的长链不饱和脂肪酸的积累在越冬前增大,对提高越冬期的抗寒力是有帮助的。本研究中,鱼油组(Diet2)与鱼油+维生素E组(Diet4)罗非鱼成活率显著提高即是饲料使用鱼油增大罗非鱼体内长链不饱和脂肪酸的积累从而提高抗寒力的表现。

细胞正常的需氧代谢过程会连续不断地产生许多活性氧(ROS),过量的活性氧会引起氧化压力增大以及细胞内大分子(蛋白质,脂肪和核酸)的损伤。脂肪过氧化是ROS引起组织损伤的一种主要的现象,它能够破坏细胞功能,改变细胞膜的物理或化学特征,导致整个机体功能的损伤(Rikans和Hornbrook,1997)。机体的防御体系抗氧化能力由酶促及非酶促反应两部分,正常情况下,包括过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase,GSH-PX)的酶促反应抗氧化酶系统与包括维生素E、维生素C、类胡萝卜素等的非酶促反应共同作用清除过多的活性氧。但在低温环境中,由于酶活性的降低,酶促反应抗氧化酶系统清除活性氧能力降低,会使活性氧自由基积累(程汉良等,2005)。本研究中,添加维生素E组(Diet3)与鱼油+维生素E组(Diet4)增加了罗非鱼对维生素E的吸收积累,在鱼体温降低酶促反应抗氧化酶系统效率降低的情况下补充了非酶促反应系统的抗氧化能力,维持了罗非鱼对活性氧的清除能力,从而减轻了低温对鱼体的伤害。Devaraj等(1996)和Chan(1998)也指出维生素E在生物膜中是最有效的链中止脂溶性抗氧化剂,能保护细胞结构免受ROS和脂肪过氧化活性产物的损伤。(参考文献略)